Las determinaciones de los consumos de oxígeno (nmoles de O2 /ml/min) se efectuan en las siguientes
condiciones:
1ª.- Respiración basal.- Se disponen en la cámara:
0.800 mL de la solución de respiración
0.200 mL de suspensión mitocondrial (correspondiente aprox. a 1 mg de proteínas)
se coloca el émbolo y registrar el consumo de oxígeno (nmoles de O2 /ml) a lo largo del tiempo, manteniendo la agitación continua.
2ª.- Inhibición de la respiración por Rotenona (inhibidor entre el complejo I y la Ubiquinona).-
Se añade a la muestra en respiración basal una punta de espátula de Rotenona. Se coloca el émbolo y registrar el consumo de oxígeno (nmoles de O2 /ml) manteniendo la agitación continua.
3ª.- Respiración en presencia de succinato (sustrato respiratorio del complejo II, succinato-DH):
Se añade a la muestra anterior 100 mL de succinato sódico 0.5 M (aprox. 50 mM o 50 mmoles de succinato en el medio). Se coloca el émbolo y se registra el consumo de oxígeno (nmoles de O2 /ml) manteniendo la agitación continua.
4ª.- Estimulación de la respiración por ADP: Se añade a la muestra anterior 100 mL de ADP 10 mM (aprox. 1 mM o 1 mmol de ADP en el medio de respiración). Se coloca el émbolo y registrar el consumo de oxígeno
5ª.- Inhibición de la respiración por PCBs (actúan a nivel del complejo III): Se añade a la muestra anterior 50 mL de soluciones de diferentes PCBs. Se coloca el émbolo y registra el
consumo de O2

referencia:
www.una.ac.cr/mhsalud/documents/CR-Futbol-FINALEsp-2009.pdf